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　　以下是?小鼠轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β2(TGF-β2)ELISA試劑盒?的實(shí)驗(yàn)使用說(shuō)明書(shū)(綜合多品牌參數(shù)及操作要點(diǎn))：

　　BS-2006  小鼠轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β2(TGFβ2)ELISA試劑盒

　　一、試劑盒組成?

　　組分 規(guī)格(96T/48T) 保存條件

　　預(yù)包被微孔板 8×12 strips / 8×6 4℃干燥

　　TGF-β2標(biāo)準(zhǔn)品 凍干粉(10,000pg/mL) 4℃(復(fù)溶后)

　　檢測(cè)抗體(生物素標(biāo)記) 120μL/70μL 4℃避光

　　HRP標(biāo)記鏈霉親和素 120μL/70μL 4℃避光

　　TMB顯色液 10mL/6mL 4℃避光

　　終止液(2M H?SO?) 10mL/6mL 室溫

　　二、實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備?

　　樣本處理?

　　血清/血漿?：采集后1000×g離心25分鐘，避免溶血或脂血。

　　細(xì)胞上清?：離心去除顆粒，分裝保存于-80℃(避免反復(fù)凍融)。

　　組織勻漿?：按重量體積比1:9加入PBS勻漿，離心取上清。

　　試劑平衡?

　　所有試劑及樣本需室溫平衡30分鐘(18-25℃)，避免37℃直接溶解。

　　標(biāo)準(zhǔn)品稀釋?

　　復(fù)溶標(biāo)準(zhǔn)品后，用稀釋液梯度稀釋至5,000pg/mL→78pg/mL(7個(gè)濃度點(diǎn))，0pg/mL為空白對(duì)照。

　　三、實(shí)驗(yàn)步驟(雙抗體夾心法)?

　　加樣?

　　每孔加入100μL標(biāo)準(zhǔn)品或樣本，37℃孵育90分鐘。

　　洗滌?

　　棄液后，用洗滌液(PBST)洗板5次，拍干。

　　加檢測(cè)抗體?

　　每孔加100μL生物素化抗體(1:100稀釋)，37℃孵育60分鐘。

　　加酶結(jié)合物?

　　加入HRP標(biāo)記鏈霉親和素(1:100稀釋)，37℃避光孵育30分鐘。

　　顯色?

　　加TMB顯色液100μL/孔，避光反應(yīng)15-20分鐘(顯藍(lán)色)。

　　終止與讀數(shù)?

　　加50μL終止液(黃色)，450nm波長(zhǎng)測(cè)OD值(需在10分鐘內(nèi)完成)。

　　四、數(shù)據(jù)分析?

　　標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制?

　　以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，擬合四參數(shù)邏輯曲線(R2>0.99)。

　　樣本濃度計(jì)算?

　　根據(jù)樣本OD值從曲線反推濃度，超出范圍需稀釋后重測(cè)。

　　五、注意事項(xiàng)?

　　精密度控制?

　　批內(nèi)CV<10%，批間CV<12%。

　　干擾因素?

　　避免細(xì)菌污染(內(nèi)源性HRP導(dǎo)致假陽(yáng)性)、反復(fù)凍融或劇烈震蕩。

　　保存條件?

　　未使用的微孔板條需密封防潮，2-8℃保存。

　　六、技術(shù)參數(shù)?

　　檢測(cè)范圍?：15.6-1000pg/mL(靈敏度9.375pg/mL)。

　　適用樣本?：血清、血漿、細(xì)胞上清、組織勻漿。

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